Los territorios que luego constituirían la gobernación del Tucumán estuvieron divididos entre dos de las gobernaciones creadas el 21 de mayo de 1534 por el monarca Carlos I de España y Carlos V de Alemania: la gobernación de Nueva Toledo –para Diego de Almagro– y la gobernación de Nueva Andalucía –para Pedro de Mendoza–. Cada una de estas gobernaciones tenía 200 leguas de ancho de norte a sur y abarcaba desde la costa del océano Pacífico hasta la costa atlántica y línea de la demarcación con Portugal.